服务名称:蛋白免疫印迹(Western Blot)
服务简介:蛋白免疫印迹原理是被检测的蛋白通过聚丙烯酰氨凝胶电泳,按照分子质量大小不同被分离开,然后转移到固相载体NC膜或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体发生免疫反应,再与酶、荧光或同位素标记的第二抗体发生反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。由于Western Blot检测的高特异性和敏感性,现已成为分子生物学、生物化学及免疫遗传学中常用的一种实验方法,可对蛋白进行定性及半定量分析。
项目优势:
1. 操作简单快捷,可在短时间内完成检测;
2. 特异性高,灵敏度高,可达ng级,理论上可达pg级;
3. 可准确区分膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、线粒体蛋白;
3. 本公司技术人员拥有丰富的Western blot实战经验,专业的科研精神,承诺提供完善且真实的信息报告。
服务流程:
服务周期:5个工作日
结果展示:
图为对不同分子量蛋白进行检测结果
图为检测连接Flag标签的质粒转染情况
图为P1、P2、P3基因敲除后三种蛋白表达情况
应用领域:该技术现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
客户提供材料:待检测样本、特异性抗体及上样顺序
送样要求:液体样品需离心,取上清,保存;细胞样品需冰PBS清洗2次后,离心,尽量吸除上清,留细胞沉淀,保存;组织样品需取出后用生理盐水或PBS冲去血液、粪便等杂质,滤纸吸干水分,保存。于-80℃保存,尽量1周内提取蛋白。核蛋白及膜蛋白提取需新鲜样本,不可冻存。干冰运输。核蛋白及膜蛋白只接收短距离(提取后2h内送到)冰上运输,或已提取出的蛋白干冰运输。
样品类型 |
用量 |
细胞 |
1×106 |
组织 |
30 mg |
液体 |
100 μl |
蛋白样品 |
V≥100 μl,c≥2 mg/ul |
核蛋白及膜蛋白-样品量*5。检测指标数超过5种需增加样品量。
交付材料:
1. Word版项目报告一份(包括样品、试剂、抗体信息,操作流程,实验结果等);
2. 所有原始曝光图片(四种格式:目的蛋白多重高比特格式、目的蛋白目标图片8比特格式、膜8比特格式、目的蛋白与marker叠加格式);
3. Excel表格数据处理(目标蛋白灰度值、内参灰度值、目标蛋白与内参灰度值比值);
4. Origin原始格式文件柱形图及导出的TIF格式图片;
5. PPT格式的整体图片。
服务说明:
1、Western blot每板胶最多检12个样品;
2、服务方免费提供常见的二抗(抗鼠、抗兔的IgG型二抗)及内参(GAPDH、β-actin);
3、如需阳性对照和阴性对照,则由委托方提供。